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X-Gal
X-Gal
 X-Gal
X-Gal也称5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside或5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside,X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的显色底物,在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物。常用于β-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选。
分子式为C14H15BrClNO6,分子量为408.63,CAS Number 7240-90-6。 
X–Gal是β–半乳糖苷酶(β–galactosidase)的底物,水解后呈蓝色。基于这个特点,pUC系列载体DNA(或其他带有lacZ 基因载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。 
使用方法 : 
首先把X-Gal配制成20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液(-20℃避光保存),然后在100 ml的琼脂培养基中,加入200 μl的上述溶液、100 μl的IPTG(24 mg/ml)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成X-Gal、IPTG、Amp平板培养基。当DNA片段插入*pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体),然后转化*lacZ缺失细胞中后,涂布上述的X–Gal、IPTG、Amp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。 
注意事项 : 
◆ 培养噬菌体时,Top agar中的添加量为:50 μl/3 ml(20mg/ml)。 
◆ 含有X-Gal的培养基4℃避光保存,须在1~2周内使用。
IPTG
IPTG 
诱导原理 
作用
中文品名: 异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷 
商品名称: Isopropyl β-D-1-Thiogalactopyranoside 
英文简称: IPTG 
产品别名: Isopropyl β-D-Thiogalactoside 
通用CAS : 367-93-1 
产品纯度: Sigma ≥99%, Merck ≥98% ,INALCO≥99% 
产品性状: 白色或白色粉末,溶于水后呈清亮无色液体 
分 子 式: C9H18O5S 
分 子 量: 238.30 
保存温度: 2-8°C冷藏保存 ,配制好后保存于-20°C,室温可放置一个月 
主要作用:异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一种作用极强的诱导剂,不被细*代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用 
IPTG是β–半乳糖苷酶的活性诱导物质。基于这个特性,当pUC系列的载体DNA(或其他带有lacZ 基因载体DNA)以lacZ 缺失细胞为宿主进行转化时、或用M13噬菌体的载体DNA进行转染时,如果在平板培养基中加入X–Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑选出基因重组体。此外,它还可以作为具有lac或tac等启动子的表达载体的表达诱导物使用。 
RNA聚合酶与P序列结 合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳糖进入细胞,经b-半乳糖苷 酶催化,转变为半乳糖。后者作为一种诱导剂分子结合阻遏蛋白,使蛋白构象变化,导致阻遏蛋白与O序列解离、发生转录。异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是一 种作用极强的诱导剂,不被细*代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。 

 

二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培养基。 

 

当DNA片段插入*pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体),然后转化*lacZ缺失细胞中后,涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基,可根据长出菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组体)。 
作用
诱导外源基因的表达,普遍应用于原核表达系统,使其表达量增高,产物稳定,具有易鉴定,易纯化的优点。